國家商檢局關(guān)于對日出口凍雞二氯二甲吡啶酚檢驗的通知 （一九九一年一月二十四日）

國家商檢局關(guān)于對日出口凍雞二氯二甲吡啶酚檢驗的通知

（一九九一年一月二十四日）

經(jīng)多次反復(fù)驗證已完成對日出口凍雞二氯二甲吡啶酚的檢驗方法?，F(xiàn)印發(fā)給你們，請按此方法檢驗放行出口。

檢驗取樣：按1990年11月15日北京外貿(mào)、商檢緊急會議商定的辦法進(jìn)行取樣，即以生產(chǎn)日作批，每批不得少于一個樣品，每個樣品由相當(dāng)于5-10只雞的不同部位的肉組成。

在恢復(fù)出口檢驗時：（一）對一九九0年十二月底前生產(chǎn)的庫存產(chǎn)品，暫不檢驗出口；（二）對出口貨源要做到心中有數(shù)，在加強對養(yǎng)雞場飼養(yǎng)用藥、停藥期的監(jiān)督管理的基礎(chǔ)上，對新加工生產(chǎn)的出口凍雞肉經(jīng)嚴(yán)格檢驗，合格后放行出口。

關(guān)于今年1-3月份日本厚生省重點監(jiān)測的藥殘，望各局加緊方式驗證，爭取早日實施出口檢驗。

附件：　 雞肉組織中二氯二甲吡淀酚殘留量測定方法

1.適用范圍

本方法適用于雞肉組織中二氯二甲吡淀酚殘留量的測定

2.方法原理

用甲醇提取雞肉組織中的二氯二甲吡淀酚，提取液過濾后，經(jīng)氧化鋁、陰離子交換柱凈化。洗脫液用重氮甲烷甲基化，生成的二氯二甲吡淀甲醚（3.5-二氯4-甲氧基-2.6-二甲基吡淀）用電子捕獲氣相色譜法測定。與標(biāo)準(zhǔn)比較，求出其含量。適用濃度為：雞肉中0.01PPｍ以上。

3.試劑

3.1　甲醇：優(yōu)級純

3.2　苯：分析純（重蒸餾）

3.3　1N　NａOH水溶液

3.4　2.4-二硝基氯苯（內(nèi)標(biāo)物）：優(yōu)級純

3.5　提取用苯：濃度為0.05G／ｍｌ的2.4-二硝基氯苯的苯溶液。

3.6　助濾劑：用甲醇清洗，風(fēng)干。

3.7　氧化鋁：層析用，中性，100-200目

3.8　陰離子交換樹脂：Dａｗｅｘ1-Ｘ8100-200目Cｌ型或等效品

3.9　5％醋酸甲醇溶液：將25ｍｌ冰醋酸加到475ｍｌ甲醇中

3.10　無水硫酸納：分析純600℃灼燒4小時后置于干燥器中備用

3.11　重氮甲烷溶液：將裝有氫氧化鉀水溶液（濃度：0.6G／ｍｌ）10ｍｌ，乙醇35ｍｌ及乙醚10ｍｌ的混合液的雙口蒸餾瓶置于磁力攪拌器加熱板上的水浴中，水溫70℃，將攪拌子放入瓶中，接上滴液漏斗和高效冷凝器，冷凝器后串連有兩個125ｍｌ的燒瓶。在第二個燒瓶中放在10ｍｌ乙醚，且入口應(yīng)插到乙醚液面以下。在冰水浴中冷卻進(jìn)兩個接收瓶。邊用磁力攪拌器攪拌邊從滴液漏斗中滴加N-甲基-N-硝基-P-甲苯磺胺乙醚溶液（21.5G／140ｍｌ），滴完全部溶液的時間控制在20ｍｉN以上。當(dāng)蒸餾液呈淡黃色時，停止蒸餾。將兩個接收瓶中的液體合并，在70℃水浴上再蒸餾，其蒸餾液作為重氮甲烷溶液。此液密閉置于冰箱中保存，保存期為一個月。

3.12　二氯二甲吡淀酚標(biāo)準(zhǔn)溶液

3.12.1　二氯二甲吡淀酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液-100ｕG／ｍｌ：精確稱取二氯二甲吡淀酚分析用標(biāo)準(zhǔn)品100ｍG，用磁力攪拌器攪拌溶解于甲醇（2-3小時），定容至1000ｍｌ。

3.12.2　中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（Ⅰ）-10ｕG／ｍｌ用移液管移取二氯二甲吡淀酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液10ｍｌ于100ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。

3.12.3　中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（Ⅱ）-1G／ｍｌ用移液管移取中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（Ⅰ）10ｍｌ放入100ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。

3.12.4　工作溶液-0.1ｕG／ｍｌ：用移液管移取中間標(biāo)準(zhǔn)液（Ⅱ）10ｍｌ放入100ｍｌ容量瓶入，用甲醇稀釋至刻度。

4.儀器

4.1　均質(zhì)器

4.2　試管：13×100ｍｍ旋蓋式耐壓性試管，蓋內(nèi)襯硅膠墊

4.3　離心管：10×100ｍｍ帶蓋

4.4　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：帶抽真空裝置和恒溫水浴鍋

4.5　氧化鋁柱：稱取6G氧化鋁，裝入內(nèi)徑為10ｍｍ的層析柱內(nèi)

4.6　陰離子交換柱：將陰離子交換樹脂伴以去離子水裝入內(nèi)徑10ｍｍ的玻璃層析柱內(nèi)，高度為1Cｍ。注入1N　NａOH水溶液100ｍｌ洗柱，然后用去離子水洗至中性。流速2ｍｌ／ｍｉN，

注入0.5ｍ　CHCOONａ水溶液100ｍｌ洗柱，用去離子水洗至中性后（流速2ｍｌ／ｍｉN）注入80％

甲醇50ｍｌ。放出甲醇至液面，略高于樹脂層。

4.7　氣相色譜儀帶電子捕獲檢測器

4.7.1　色譜分析條件

4.7.1.1　溫度：柱箱：160℃

進(jìn)樣品：220℃

檢測器：240℃

4.7.1.2　載氣：高純氮，流速：65ｍｌ／ｍｉN

4.7.2　色譜柱：玻璃柱3.2ｍｍ×2ｍ

固定相為20％DC-200涂于Gａｓ　CHROｍ　Q載體（60-80目）。使用前于200℃活化24小時以上。

5.操作方法

5.1　試樣分析

5.1.1　提取

取經(jīng)攪碎的雞肉試樣20G（精確至0.1G）于均質(zhì)杯中，加入甲醇50ｍｌ和助濾劑3G，高速均質(zhì)3ｍｉｍ，在布氏漏斗上敷上2G助濾劑。抽濾經(jīng)均質(zhì)的樣液，用40ｍｌ甲醇分2-3次洗滌均質(zhì)杯并移入布氏漏斗中，將濾液并入100ｍｌ溶量瓶中，用甲醇定容至刻度。

5.1.2　凈化

用移液管移取上述濾液20ｍｌ注入氧化鋁柱并用10ｍｌ甲醇沖洗，將流出液移入陰離子交換柱，以1ｍｌ／ｍｉN的速度流出，用10ｍｌ甲醇沖洗柱內(nèi)壁，棄去流出液。用20ｍｌ5％醋酸的甲醇　分兩次洗脫二氯二甲吡淀酚，以1ｍｌ／ｍｉN的速度流出，流出液接收于25ｍｌ的溶量瓶內(nèi)，用甲醇定容至刻度。

5.1.3　甲基化

用移液管移取上述洗脫液1ｍｌ于帶旋蓋的試管內(nèi)，試管在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上（水浴溫度為55℃）真空蒸干（可通微弱空氣流）。取出試管加入0.2ｍｌ80％，甲醇，微熱使殘渣溶解。冷至室溫，加重氮甲烷溶液1ｍｌ擰緊旋蓋使試管密封。于70℃水浴中加熱5-10ｍｉN，加熱時水浴液面應(yīng)和反應(yīng)液面相齊。取出試管冷卻至室溫，擰去旋蓋，將試管固定在70℃水浴中，僅使試管圓形底部接觸水面，加熱2-3分鐘，緩緩地蒸除醚液。加入0.1ｍｌN　NａOH溶液，5ｍｌ水和1.0ｍｌ提取用苯。蓋好試管，用力搖動混合1ｍｉN，離心3ｍｉN。

將上層苯液轉(zhuǎn)移至另一干燥的離心管中，加少量無水硫酸鈉，振搖1ｍｉN，離心1ｍｉN。

5.1.4　色譜測定

取上述離心的苯溶液4μｌ注入氣相色譜儀。測出二氯二甲吡淀甲醚峰高與內(nèi)

標(biāo)峰高的比值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出苯提取液中二氯二甲吡淀酚的濃度μG／ｍｌ。

5.2　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取二氯二甲吡淀酚測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0，2.0ｍｌ于試管中，以下按5、1、3進(jìn)行甲基化（不加1N　NａOH溶液），進(jìn)樣4μｌ進(jìn)行色譜測定。根據(jù)所求得的色譜峰與內(nèi)標(biāo)峰的峰高比對應(yīng)溶液的濃度μG／ｍｌ繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.3　回收系數(shù)R

準(zhǔn)確稱取20.0G不含二氯二甲吡淀酚且經(jīng)攪碎后的雞肉組織，分別加入相當(dāng)于0.0，0.1或0.5PPｍ的二氯二甲吡淀酚中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（Ⅱ）分別0.0，2.0或10.0ｍｌ。按5.1操作且計算出平均回收系數(shù)：

由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的PPｍ值

R＝------------

加入的PPｍ值

5.4　結(jié)果計算

　6.25（G-G'）

動物組織中的二氯二甲吡淀酚PPｍ＝----------式中：G＝由標(biāo)

　R

準(zhǔn)曲線查得樣品中二氯二甲吡啶酚的G／ｍｌ值；

G'＝由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得空白中二氯二甲吡淀酚的G／ｍｌ值。

R＝回收系數(shù)，6.25＝換算系數(shù)

5.5　補充說明

5.5.1　若無內(nèi)標(biāo)物或內(nèi)標(biāo)峰受雜質(zhì)峰影響時，可用苯提取二氯二甲吡淀甲醚，用外標(biāo)法定量。

5.5.2　樣液測定時，應(yīng)穿插注入相近濃度經(jīng)甲基化的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以校正標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.5.3　每批陰離子交換樹脂使用前，應(yīng)先做其洗脫曲線，并根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)節(jié)樹脂用量和洗脫液體積。

5.5.4　所用水為去離子水

5.5.5　所用容器首先用1：1監(jiān)酸浸泡0.5H然后用肥皂水洗滌，再用去離水沖凈。